Description
Description
Description
Features
| 问 题 | 回 答 |
| 一个孔中应接种多少个细胞？ | 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。 |
| 能否用384孔板进行试验？ | 可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液，如果加入的CCK-8体积太少，可以先将CCK-8溶液稀释1倍，然后加入培养基体积20%的量。 |
| 能否用24孔板进行试验？ | 可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液。 |
| 酚红会影响检测吗？ | 不会。培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。 |
| CCK-8与胸苷结合检测之间是否有相关性？ | 有。然而，请注意由于CCK-8使用的检测原理与胸苷检测的不同，因此结果可能不同。 |
| CCK-8能否检测细菌细胞？ | 可以检测E.coli，但不能检测酵母细胞。向100μl E.coli培养液中加入10μl CCK-8溶液，并培养1-4个小时或过夜。 |
| CCK-8稳定吗？ | CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。如果需要长期保存，我们推荐-20℃的储藏条件。 |
| 如果没有450 nm的滤光片，还可以使用哪些其他滤光片？ | 还可使用450 nm到490 nm之间的滤光片。 |
| 如何减少由于CCK-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差？ | 可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样。 |
| CCK-8是什么颜色？ | 应该是粉红色。若颜色不一样，有可能会影响测定。 |
| CCK-8能否对活细胞进行染色？ | 不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST-8)，并通过电子载体PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST8上。由于生成的甲臜也是高度水溶性的，因此CCK-8不能对细胞进行染色。 |
| CCK-8检测溶液对细胞是否有毒？ | CCK-8溶液自身因为高浓度的PMS的存在而具有一点毒性。但是，加到培养基中的CCK-8是没有毒性的，因为被稀释了10倍。因此，长时间的培养，如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK-8检测后还可以用于其他细胞增殖检测，如结晶紫检测，中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK-8的耐受力都不同，因此在需要进行长时间培养时，先检测一下细胞在加入CCK-8培养后的活力。 |
| 在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？ | 有时会有影响。如果药物具有还原性，会和CCK8发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK-8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加CCK-8)的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK-8之前更换培养基，去掉药物的影响。 |
| 每次测定的数值不一样，是什么原因？如何解决？ | 可能会有以下几个原因： 1. 当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。 一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。 2. 有可能会因为CCK-8沾在壁上而产生误差，建议在加入CCK-8后，轻轻敲击培养板以帮助混匀。 3. 每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000-100,000个/孔范围内摸索条件。 |
| 如何设定空白对照？ | 在不含细胞的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时，还应考虑药物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。 |
| 哪些物质会影响CCK8的测定？ | 当有还原性物质存在时会影响CCK-8的测定，例如含有维生素C的Glucose等 (一般培养基中的量不多，酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。 |
| 在实验中吸光度值太高，如果不能减少细胞数量，如何解决？ | 可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如：可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。 |
| 设定参比波长的目的是什么？必须设定吗？ | 不一定要设定。CCK-8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。 |
| 说明书上仅写了96孔板的测定方法，如果使用24孔板或12孔板，应该加多少量CCK-8试剂？ | 一般情况下建议加入CCK-8试剂的量是培养基体积的1/10。 |
| 在CCK-8显色过程中，如何终止反应？ | 有一下几种方法（96孔板）： ①在显色反应后，将培养板放置4℃冰箱内。②每孔加10μl 0.1 M HCL溶液。③每孔加10μl的 1%（w/v）的SDS（十二烷基硫酸钠）溶液。注意：反应停止后，应在24小时之内测定。 |
| 必须预培养细胞吗？ | 不一定。如果要向保持细胞的最好状态，建议预培养细胞。如果不做细胞预培养，细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养，但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。 |
| 如果加入的药物中含有金属，是否会有影响？ | 金属对CCK-8显色有影响。当终浓度为1 Mm的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10 Mm的话，将会100%抑制。 |
| CCK-8试剂的保存条件？ | 在避光条件下CCK-8试剂在4℃可保存一年。如果需要保存较长时间的话，推荐在-20℃下保存。但是CCK-8若反复解冻和冰冻将会增加空白吸收，从而影响检测结果，若经常使用可将试剂存放在4℃冰箱内保存。 |
| 预培养后，更换培养基需要细胞计数吗？ | 一般情况下用胰蛋白酶处理对数增长期的细胞，用血球计数盘计数，制备成一定浓度的细胞悬液即可。如果想要精密计数细胞的话，可以预培养后取培养基用血球计数盘进行计数。 |
| CCK-8对于不同的细胞，灵敏度是否一样？ | 不一样，悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。 |
| 悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别？ | 悬浮细胞由于染色比较困那，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞染色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。 |
| 应该每次做标准曲线吗？ | 建议每次做。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样，对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。如果试剂的批号不一样，灵敏度可能会有轻微的差异，对于不同的批号建议分别做标准曲线。 |
| 有时在药物作用情况下，细胞已经死亡，但是脱氢酶的活性还在，是否能计算细胞数量？ | 不能。由于CCK-8是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反映活细胞数量，如果细胞已经死亡，但脱氢酶的活性还在，则试剂测定的细胞数量将会比真实值高，不能真实反映活细胞数量，建议采用别的方法测定。 |
| 实验之前，是否需要先检测一下培养基和CCK-8是否会反应？ | 需要，可用一个孔检测一下，因为有培养基中可能含有氧化还原反应的物质，在正式实验之前有必要先确认培养基和CCK-8是否反应。一般正常在的OD值应该在0.4以下。 |
| 如果OD值太低，可以采取什么办法？ | 可以采取2个办法：① 适当增加细胞数量。② 延长加入CCK-8试剂后的染色时间。 |
4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。
Med Sci Monit . 2019 Dec 12;25:9471-9482. doi: 10.12659/MSM.920319. Transmembrane and Ubiquitin-Like Domain Containing 1 Protein (TMUB1) Negatively Regulates Hepatocellular Carcinoma Proliferation via Regulating Signal Transducer and Activator of Transcription 1 (STAT1)
Am J Physiol Cell Physiol 2019 Nov1;317(5):C932-C941. doi:10.1152/ajpcell.00534.2018
Exosomes secreted from osteocalcin-overexpressing endothelial progenitor cells promote endothelial cell angiogenesis
J Dairy Sci.2019 Nov;102(11):9586-9597. doi: 10.3168/jds.2019-16429.
Investigation and comparison of the anti-tumor activities of lactoferrin, α-lactalbumin, and β-lactoglobulin in A549, HT29, HepG2, and MDA231-LM2 tumor models
J Cell Mol Med .2019 Sep;23(9):5907-5919.doi: 10.1111/jcmm.14386.
Long non-coding RNA NR2F1-AS1 promoted proliferation and migration yet suppressed apoptosis of thyroid cancer cells through regulating miRNA-338-3p/CCND1 axis
Biomed Res Int.2019 May 26;2019:3018357.doi: 10.1155/2019/3018357.
Galangin Suppresses Renal Inflammation via the Inhibition of NF- κ B, PI3K/AKT and NLRP3 in Uric Acid Treated NRK-52E Tubular Epithelial Cells
BMB Rep.2019 Apr;52(4):277-282.doi: 10.5483/BMBRep.2019.52.4.263.
Insufficient radiofrequency ablation-induced autophagy contributes to the rapid progression of residual hepatocellular carcinoma through the HIF-1α/BNIP3 signaling pathway
J Cell Physiol.2019 Feb 14. doi: 10.1002/jcp.28314.
MFGE8 protects against CCl 4 -induced liver injury by reducing apoptosis and promoting proliferation of hepatocytes
BMC Pulm Med.2019 Feb 6;19(1):29.doi: 10.1186/s12890-019-0791-0.
CD147 increases mucus secretion induced by cigarette smoke in COPD
Pharmacology 2018;102(1-2):58-66. doi: 10.1159/000489564.
Galangin Induces Apoptosis in MCF-7 Human Breast Cancer Cells Through Mitochondrial Pathway and Phosphatidylinositol 3-Kinase/Akt Inhibition
Biomed Pharmacother.2018 Feb;98:619-625.doi: 10.1016/j.biopha.2017.12.057.
Brevilin A induces apoptosis and autophagy of colon adenocarcinoma cell CT26 via mitochondrial pathway and PI3K/AKT/mTOR inactivation
Biomed Pharmacother.2017 Nov;95:11-17. doi: 10.1016/j.biopha.2017.08.011
Carapax Trionycis extracts inhibit fibrogenesis of activated hepatic stellate cells via TGF-β1/Smad and NFκB signaling
J Cancer Res Clin Oncol . 2017 Nov;143(11):2171-2181. doi:10.1007/s00432-017-2470-y.
α2,6-linked sialic acid serves as a high-affinity receptor for cancer oncolytic virotherapy with Newcastle disease virus
Mol Med Rep.2017 Oct;16(4):4593-4602. doi: 10.3892/mmr.2017.7201.
CD147 blockade as a potential and novel treatment of graft rejection
PeerJ.2017 May 16;5:e3233. doi: 10.7717/peerj.3233.
Radiosensitization effect of hsa-miR-138-2-3p on human laryngeal cancer stem cells
Am J Chin Med . 2017;45(2):369-384. doi: 10.1142/S0192415X17500239
Flavonoids and Tannins from Smilax china L. Rhizome Induce Apoptosis Via Mitochondrial Pathway and MDM2-p53 Signaling in Human Lung Adenocarcinoma Cells
Oncol Lett .2017 Apr;13(4):2161-2168. doi: 10.3892/ol.2017.5726.
Expression and function of MutT homolog 1 in distinct subtypes of breast cancer
J Exp Clin Cancer Res . 2017 Jan 16;36(1):13. doi: 10.1186/s13046-016-0474-0.
CAPZA1 modulates EMT by regulating actin cytoskeleton remodelling in hepatocellular carcinoma
Sci Rep . 2016 Nov 21;6:35210. doi: 10.1038/srep35210.
N-linked glycosylation at Asn152 on CD147 affects protein folding and stability: promoting tumour metastasis in hepatocellular carcinoma
Material safety data sheets (MSDS)
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.